Личинки многих видов являются настоящими паразитами, они живут в тканях растений, а также на теле или во внутренних органах млекопитающих и птиц. Взрослые особи двукрылых питаются росой, нектаром цветов, соком растений, навозом, часть семейств представлены исключительно хищниками, охотящимися на других насекомых.